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Galectin-3在垂体腺瘤中的表达及其与肿瘤侵袭性的关系

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更新时间:2012年08月17日 点击:
软件版本:国产软件
软件大小:0KB
软件授权:免费版
软件语言:简体中文
开发商家:王永,杨辉,何家全,黄绍崧
应用平台:Win9x/NT/2000/XP
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  【摘要】目的 探讨Galectin-3表达与垂体腺瘤侵袭性的关系。 方法 采用任祖渊关于侵袭性垂体腺瘤的判定标准,将50例垂体腺瘤标本分为侵袭性组 (24与非侵袭组 (26);运用免疫组化SP法检测标本中Galectin-3蛋白的表达情况。 结果 Galectin-3蛋白表达局限于PRL型、ACTH型腺瘤及部分多激素分泌型腺瘤,在其他类型垂体腺瘤中表达呈阴性;Galectin-3在上述类型侵袭性垂体腺瘤中的表达水平 (3.264 ± 1.066) 明显高于非侵袭性垂体腺瘤 (1.613 ± 0.850)(P <0.01)。 结论 Galectin-3可能参与了垂体腺瘤的侵袭性生长过程,可以作为评价这些类型腺瘤侵袭性的有效指标。

 

  【关键词】 垂体肿瘤 肿瘤浸润 半乳糖凝集素免疫组织化学

  本研究采用免疫组化SP法研究垂体腺瘤中半乳糖凝集素-3 (Galectin-3) 的表达特征,探讨其与垂体腺瘤侵袭性的关系。

  材料与方法

  1.1 组织标本 病例纳入标准:①经手术及病理证实为垂体腺瘤;②有完整临床资料 (包括术前MRI检查、内分泌激素水平检查、详细手术记录及术后定期随访资料);③垂体腺瘤石蜡标本完整。20048~200511月在我科手术治疗的垂体腺瘤病人中,50例符合上述标准,纳入本研究。其中男19例,年龄2674岁,平均45.5;31例,年龄2373岁,平均42.2岁。病程4 d~20年,平均45.5个月。所有标本均经10%中性甲醛溶液固定,常规石蜡包埋,μm厚度连续切片,共5张,其中1张作常规苏木精-伊红染色,再行病理组织学检查证实诊断,其余留作免疫组化染色备用。

  1.2 垂体腺瘤分型 根据任祖渊[1]所述的关于侵袭性垂体腺瘤的判定标准,将腺瘤标本分为侵袭性组 (24和非侵袭性组 (26)。侵袭性组中多激素分泌腺瘤8例,无分泌功能腺瘤7例,泌乳素 (PRL) 腺瘤2例,促性腺激素腺瘤2例,生长激素 (GH) 腺瘤3例,促肾上腺皮质激素 (ACTH) 腺瘤1例,促甲状腺激素 (TSH) 腺瘤1;非侵袭性组中多激素分泌腺瘤12例,无分泌功能腺瘤6例,PRL腺瘤4例,促性腺激素腺瘤3例,GH腺瘤1例。

  1.3 主要试剂 一抗兔抗人Galectin-3多克隆抗体 (浓缩型购自美国Santa-Cruz公司,超敏型免疫组化SP试剂盒及DAB显色试剂盒均购自福建迈新生物技术开发公司。

  1.4 实验方法及步骤 采用免疫组化SP法检测腺瘤组织中Galectin-3的表达,DAB显色,苏木素复染。操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。所有组织切片随机编号后,常规脱蜡水化;切片置于0.01 mmol/L柠檬酸盐缓冲液 (pH 6.0) 中,采用高温高压法进行组织抗原修复;每张切片加过氧化酶阻断溶液室温下孵育10 min,正常非免疫动物血清室温下孵育10 min;除去血清,加一抗Galectin-3 (1100) 置于湿盒中℃过夜,滴加生物素标记的二抗室温下孵育10 min,滴加链霉素亲合素-过氧化物酶溶液室温下孵育10 minDAB显色3~10 min;苏木素复染,PBS冲洗返蓝,梯度酒精脱水干燥,二甲苯透明,中性树胶封片。置于显微镜下观察。阴性对照以PBS代替一抗,阳性对照采用间变性大细胞淋巴瘤组织。

  1.5 结果判定 Galectin-3阳性染色主要位于细胞质,呈棕黄色。本研究采用半定量积分法从两方面对Galectin-3表达程度进行评分:①阳性细胞染色深度:未见染色为0分,轻度染色为1分,中度为2分,重度为3;②阳性细胞的百分数:未见染色为0分,染色细胞<25%1分,25%50%2分,>50%3分。两项得分相加作为评定标准,分值0~6分。观察5个高倍镜 (400视野,计算平均得分,02分为阴性,34分为弱阳性,56分为强阳性表达。

  1.6 统计学分析 测得数据用均数 ± 标准差表示。应用统计分析软件SPSS10.0,采用单因素方差分析。

  结果 (12;1~3)

  Galectin-3阳性染色主要位于腺瘤细胞的细胞质,而胞核未见,以弥散性存在为主。Galectin-3阳性表达局限于PRL型、ACTH型及部分多激素分泌腺瘤,共27例,其中侵袭性11例,非侵袭性16;侵袭性垂体腺瘤表达明显高于非侵袭性,差异非常显著 (P <0.01)。其他激素类型腺瘤中未见阳性表达。

  讨论

  凝集素 (Lectin) 是一类能选择性识别糖结构并与之非共价结合的蛋白质。动物凝集素主要分为四大类:C型凝集素 (包括选择蛋白)P型凝集素、五聚体蛋白和Galectin (曾被称为S型凝集素)[2]

  在半乳糖凝集素家族成员中,研究较为成熟的为Galectin-3Galectin-1,其中又以Galectin-3与肿瘤的生物学行为关系密切。Galectin-3与细胞内糖蛋白、细胞表面分子和细胞外基质作用,参与细胞黏附、增殖、凋亡、血管形成以及mRNA剪切等,与许多肿瘤细胞的增殖、侵袭及转移等恶性生物学行为密切相关[3-7]。目前许多研究表明:Galectin-3的表达与中枢神经系统恶性肿瘤的侵袭、恶性程度分级及预后密切相关。1997年,Bresalier[8]首先用免疫组化方法研究42例胶质瘤和29例脑转移瘤的Galectin-3表达,结果发现:低级别胶质瘤呈低表达,高级别的间变型星形细胞瘤和胶质母细胞瘤呈高表达;Galectin-3表达与胶质瘤的恶性程度分级之间存在密切相关性,即随着Galectin-3表达增加,胶质瘤的恶性程度增加,且Galectin-3表达与病人的生存率呈负相关。Camby[9]的体外实验研究结果表明:Galectin-1Galectin-3Galectin-8等三种半乳糖凝集素均与胶质瘤的侵袭、迁移有关,其中Galectin-3对胶质母细胞瘤细胞迁移的调节潜能最大,而迁移又与侵袭密切相关;H4U373等细胞的裸鼠移植瘤实验也证实:脑实质侵袭部分的Galectin-3表达显著性高于非侵袭部分;他们对116例星形细胞瘤手术标本进行免疫组化研究,得出了与Bresalier[8]相似的结果,即Galectin-3表达与病人的存活率呈负相关,低表达的病人预后好。

  侵袭性垂体腺瘤与非侵袭性垂体腺瘤比较,具有以下特点:①以年轻病人多见。但也有报道认为其与年龄无明显相关性。②常累及脑神经,侵蚀邻近硬膜并包绕颈内动脉,肿瘤卒中的发生率高。③临床症状进展快,尤其是视力、视野改变往往迅速而且严重,这与肿瘤增长迅速有关。④手术全切除困难,术后需要结合放疗和药物治疗。术后复发率高,复发时间相对较短。许多研究表明:术后复发与肿瘤的侵袭性行为显著相关。⑤影像学检查多见骨质破坏。对于其发病机制尚无明确定论。鉴于其与恶性肿瘤有许多相似的特性,对其发病机制及治疗方面的研究也多借鉴与恶性肿瘤类似的方法。Riss[10]研究了Galectin-3在垂体腺瘤中的表达情况,发现Galectin-3局限性地表达于PRL型和ACTH型腺瘤,且在PRLACTH腺癌组的阳性表达率显著性高于PRLACTH腺瘤组。王洪等[11]研究了Galectin-332PRL型腺瘤的表达,结果16例侵袭性组均为阳性,而16例非侵袭性组中仅2例阳性,侵袭性组的阳性表达率显著性高于非侵袭性组,说明Galectin-3的高表达可能与垂体PRL腺瘤的侵袭性有关。本研究结果表明:①Galectin-3在垂体腺瘤中的表达局限于PRL型、ACTH型及部分多激素分泌型腺瘤。②在表达Galectin-3的腺瘤类型中,侵袭性腺瘤组表达较非侵袭性腺瘤组显著性增高,差异显著。这与国外学者研究一致,再次证实了Galectin-3在垂体腺瘤中是有功能性的。

  文献表明:垂体腺瘤发生癌变的概率小于0.2%。到目前为止,英文文献报道垂体腺癌约140例,其激素分类主要为PRL型和ACTH[12]。结合本研究结果,推测Galectin-3可能参与了垂体腺瘤的恶变过程。因此,Galectin-3可能成为临床判断垂体腺瘤侵袭性和良恶性变化的重要指标之一;通过进一步研究Galectin-3在垂体腺瘤中的作用机制,可能为治疗侵袭性 (或恶性垂体腺瘤提供有效的靶点。

  【参考文献】

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  [10] RISS D, JIN L, QIAN X, et al. Differential expression of galectin-3 in pituitary tumors [J]. Cancer Res, 2003, 

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  [11] 王洪王明栋马文斌半乳凝素-3在侵袭性垂体泌乳素腺瘤中表达 [J]. 中国医学科学院学报

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  [12] RAGEL B T, COULDWELL W T. Pituitary carcinoma: a review of the literature [J]. Neurosurg Focus, 2004, 

16(4): E7.

 

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